مقدمه ای بر محیط کشت میکروبی رایج (I)

مقدمه ای بر محیط کشت میکروبی رایج (I)

محیط کشت نوعی ماتریکس مواد مغذی مخلوط است که به طور مصنوعی از مواد مختلف با توجه به نیاز رشد میکروبی مختلف تهیه می شود که برای کشت یا جداسازی میکروارگانیسم های مختلف استفاده می شود.بنابراین، ماتریس مواد مغذی باید حاوی مواد مغذی (شامل منبع کربن، منبع نیتروژن، انرژی، نمک معدنی، فاکتورهای رشد) و آب قابل استفاده توسط میکروارگانیسم ها باشد.بسته به نوع میکروارگانیسم ها و هدف آزمایش، انواع و روش های مختلف تهیه محیط کشت وجود دارد.

برخی از محیط های کشت رایج در آزمایش به شرح زیر معرفی می شوند:

محیط آگار تغذیه ای:

محیط آگار مغذی برای تکثیر و کشت باکتری های معمولی، برای تعیین تعداد کل باکتری ها، حفظ گونه های باکتریایی و کشت خالص استفاده می شود.مواد اصلی عبارتند از: عصاره گوشت گاو، عصاره مخمر، پپتون، کلرید سدیم، پودر آگار، آب مقطر.پپتون و پودر گوشت گاو منابع نیتروژن، ویتامین، اسید آمینه و کربن را تامین می کنند، کلرید سدیم می تواند فشار اسمزی متعادل را حفظ کند و آگار منعقد کننده محیط کشت است.

آگار نوتریشنال اساسی ترین نوع محیط کشت است که حاوی بیشتر مواد مغذی مورد نیاز برای رشد میکروبی است.از آگار تغذیه ای می توان برای کشت معمول باکتری استفاده کرد.

محیط آگار خون:

محیط بلاد آگار نوعی محیط پپتون عصاره گوشت گاو است که حاوی خون حیوان دفیبرینه شده (به طور کلی خون خرگوش یا گوسفند) است.بنابراین، علاوه بر مواد مغذی مختلف مورد نیاز برای کشت باکتری، می تواند کوآنزیم (مانند فاکتور V)، هِم (عامل X) و سایر عوامل رشد ویژه را نیز تامین کند.بنابراین، محیط کشت خون اغلب برای کشت، جداسازی و حفظ برخی میکروارگانیسم های بیماری زا که برای تغذیه نیاز دارند، استفاده می شود.

علاوه بر این، معمولاً از آگار خون برای آزمایش همولیز استفاده می شود.در طول فرآیند رشد، برخی از باکتری ها می توانند همولیزین تولید کنند تا گلبول های قرمز را بشکند و حل کند.هنگامی که آنها در صفحه خون رشد می کنند، حلقه های همولیتیک شفاف یا شفاف در اطراف کلنی مشاهده می شود.بیماری زایی بسیاری از باکتری ها به ویژگی های همولیتیک مربوط می شود.از آنجا که همولیزین تولید شده توسط باکتری های مختلف متفاوت است، ظرفیت همولیتیک نیز متفاوت است و پدیده همولیز در صفحه خون نیز متفاوت است.بنابراین، آزمایش همولیز اغلب برای شناسایی باکتری ها استفاده می شود.

رسانه TCBS:

TCBS یک محیط ساکارز آگار نمک صفراوی تیوسولفات سیترات است.برای جداسازی انتخابی ویبریو بیماری زا.پپتون و عصاره مخمر به عنوان مواد مغذی اساسی در محیط کشت برای تامین منبع نیتروژن، منبع کربن، ویتامین ها و سایر عوامل رشد مورد نیاز برای رشد باکتری ها استفاده می شوند.غلظت بالاتر کلرید سدیم می تواند نیازهای رشد هالوفیل ویبریو را برآورده کند.ساکارز به عنوان منبع کربن قابل تخمیر؛سیترات سدیم، محیط قلیایی با pH بالا و تیوسولفات سدیم از رشد باکتری های روده جلوگیری می کند.پودر صفرا گاو و تیوسولفات سدیم عمدتاً رشد باکتری های گرم مثبت را مهار می کنند.علاوه بر این، تیوسولفات سدیم نیز منبع گوگرد را فراهم می کند.در حضور سیترات آهن، سولفید هیدروژن توسط باکتری ها قابل تشخیص است.اگر باکتری های تولید کننده سولفید هیدروژن وجود داشته باشد، رسوب سیاه روی صفحه تولید می شود.شاخص های محیط TCBS عبارتند از بروموکرزول آبی و تیمول آبی که شاخص های باز اسیدی هستند.بروموکرزول آبی یک نشانگر اسید-باز با محدوده تغییر pH 3.8 (زرد) تا 5.4 (آبی-سبز) است.دو محدوده تغییر رنگ وجود دارد: (1) محدوده اسیدی pH 1.2 تا 2.8 است که از زرد به قرمز تغییر می کند.(2) محدوده قلیایی PH 8.0 تا 9.6 است که از زرد به آبی تغییر می کند.

محیط کشت پپتون آگار سویا پنیر TSA:

ترکیب TSA مشابه ترکیبات نوترینت آگار است.در استاندارد ملی معمولاً برای آزمایش باکتری های ته نشین شده در اتاق های تمیز (مناطق) صنعت داروسازی استفاده می شود.نقطه آزمایش را در ناحیه مورد آزمایش انتخاب کنید، صفحه TSA را باز کنید و آن را در نقطه آزمایش قرار دهید.نمونه‌ها باید در زمان‌های مختلف زمانی که بیش از 30 دقیقه در معرض هوا قرار می‌گیرند گرفته شود و سپس برای شمارش کلنی‌ها کشت داده شوند.سطوح مختلف تمیزی به تعداد کلنی های مختلف نیاز دارد.

مولر هینتون آگار:

محیط MH یک محیط میکروبی است که برای تشخیص مقاومت میکروارگانیسم ها به آنتی بیوتیک ها استفاده می شود.این یک محیط غیر انتخابی است که اکثر میکروارگانیسم ها می توانند روی آن رشد کنند.علاوه بر این، نشاسته موجود در ترکیبات می تواند سموم آزاد شده توسط باکتری ها را جذب کند، بنابراین تاثیری بر نتایج عملیات آنتی بیوتیکی نخواهد داشت.ترکیب محیط MH نسبتاً شل است که منجر به انتشار آنتی بیوتیک ها می شود، به طوری که می تواند منطقه بازدارندگی رشد آشکاری را نشان دهد.در صنعت بهداشت چین از محیط MH برای تست حساسیت دارویی نیز استفاده می شود.هنگام انجام آزمایش حساسیت دارویی برای برخی از باکتری‌های خاص، مانند استرپتوکوک پنومونیه، ممکن است 5% خون گوسفند و NAD برای برآوردن نیازهای تغذیه‌ای مختلف به محیط اضافه شود.

اس اس آگار:

SS آگار معمولاً برای جداسازی و کشت انتخابی سالمونلا و شیگلا استفاده می شود.این باکتری های گرم مثبت، اکثر کلیفرم ها و پروتئوس را مهار می کند، اما بر رشد سالمونلا تأثیری نمی گذارد.تیوسولفات سدیم و سیترات آهن برای تشخیص تولید سولفید هیدروژن استفاده می شود و مرکز مستعمره را سیاه می کند.قرمز خنثی نشانگر pH است.کلنی تولید کننده اسید قند در حال تخمیر قرمز است و کلنی شکر تخمیر نشده بی رنگ است.سالمونلا کلنی بی رنگ و شفاف با مرکز سیاه یا بدون آن است و شیگلا کلنی بی رنگ و شفاف است.