چندین آنزیم که معمولاً در آزمایشات PCR استفاده می شود

واکنش زنجیره ای پلیمراز، به اختصارPCRبه زبان انگلیسی، یک تکنیک زیست شناسی مولکولی است که برای تکثیر قطعات خاص DNA استفاده می شود.می توان آن را به عنوان یک تکثیر DNA ویژه در خارج از بدن در نظر گرفت که می تواند مقدار بسیار کمی از DNA را به میزان زیادی افزایش دهد.در طول کلPCRدر فرآیند واکنش، یک دسته از مواد نقش حیاتی ایفا می کنند - آنزیم ها.

1. Taq DNA

در آزمایشات در روزهای اولیهPCRدانشمندان از Escherichia coli DNA polymerase I استفاده کردند، اما این آنزیم یک مشکل دارد: این آنزیم باید هر بار که یک چرخه انجام می شود، آنزیم جدید را دوباره پر کند، که مراحل عملیات را کمی پیچیده می کند و تقویت کامل خودکار آن دشوار است.این مشکل پس از اینکه دانشمندان به طور تصادفی DNA پلیمراز Taq را از Thermus aquaticus در سال 1988 جدا کردند، حل شد. از آن زمان، تکثیر خودکار DNA به واقعیت تبدیل شد.کشف این آنزیم نیز باعث می شودPCRتکنولوژی یک فناوری راحت، کاربردی و جهانی است.در حال حاضر، Taq DNA پلیمراز رایج ترین پلیمراز در کیت های DNA است.

2. PfuDNA

همانطور که در بالا ذکر شد، Taq DNase دارای یک باگ بزرگ است، بنابراین دانشمندان Taq DNA پلیمراز را تا حدی اصلاح کرده اند تا از تقویت غیر اختصاصی به دلیل عدم تطابق و در نتیجه نتایج آزمایش نادرست جلوگیری کنند.اما اصلاح Taq DNA پلیمراز می تواند از فعالیت DNA پلیمراز در دمای اتاق جلوگیری کند.PfuDNA پلیمراز به خوبی می تواند معایب فوق را در Taq DNA پلیمراز جبران کند، به طوری که واکنش PCR می تواند به طور معمول انجام شود و میزان موفقیت تقویت ژن هدف می تواند به طور موثر بهبود یابد.

3. ترانس کریپتاز معکوس

ترانس کریپتاز معکوس در سال 1970 کشف شد. این آنزیم از RNA به عنوان الگو، dNTP به عنوان سوبسترا استفاده می کند، از اصل جفت شدن باز پیروی می کند و یک رشته DNA تک رشته ای مکمل الگوی RNA را در جهت 5'-3' سنتز می کند.ترانس کریپتاز معکوس در درجه اول به فعالیت DNA پلیمراز از الگوهای DNA یا RNA وابسته است و بنابراین فعالیت اگزونوکلئاز 3'-5 ندارد.با این حال، دارای فعالیت RNase H است که طول سنتز ترانس کریپتاز معکوس را تا حدی محدود می کند.به دلیل وفاداری کم و پایداری حرارتی رونوشت معکوس وحشی، دانشمندان آن را نیز اصلاح کردند.

برایPCRدر آزمایشات، مواد مصرفی اصلی عبارتند از: لوله PCR فردی، لوله PCR 4/8 نواری، صفحات PCR.

لابیومواد مصرفی PCRموارد زیر را داشته باشندمزایای:

صفحات PCR: سازگاری چرخه حرارتی گسترده؛با کنتراست بالا، شناسایی آسان خوب؛انعکاس فلورسانس چاه؛ خوبانتقال حرارت؛دارای گواهی DNase، RNase، DNA، مهارکننده‌های PCR، و بدون پیروژن آزمایش شده است.

لوله های PCR مجزا: مقاوم در برابر تبخیر؛ خوبانتقال حرارت؛شفافیت نوری عالی؛ دارای گواهی DNase، RNase، DNA، مهارکننده‌های PCR، و بدون پیروژن آزمایش شده است.

لوله های PCR 4/8 نواری: دیوارهای بسیار نازک، شفافیت بالا، انعکاس فلورسانس خوب.می تواند در صنایع داروسازی، صنایع غذایی و زیست شناسی مولکولی استفاده شود؛ مواد PP با کیفیت بالا و بکر؛ DNase گواهی شده، RNase، DNA، مهارکننده های PCR و آزمایش شده بدون پیروژن.